NY∕T 563-2016 禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术(农业)
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ID： |
43367A159D7C43B28CD4002E02A2CB53 |
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文件大小(MB)： |
0.71 |
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页数： |
11 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-25 |
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ICS 11 .220,B 41 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/ T 563一2016,代替NY/T 563- 2002,禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术,Diagnostic techniques for fowl cholera (avian pasteurellosis),2016 - 1 0- 26 发布2017 - 04 - 01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/T 563-2016,前言,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准代替NY/ T 563一2002(( 禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术》。与NY/ T 563-2002 相比，除,编辑性修改外，主要技术变化如下:,一"范围"部分增述了多杀性巳氏杆菌PCR 检测方法和英膜多重PCR 鉴定方法的适用性(见1) ;,一一"病原分离"部分增加了多杀性巴氏杆菌生长的脑心浸出液琼脂培养基和脑心浸出液肉汤培养,基( 见6 . 1);,一一一增加了多杀性巴氏杆菌PCR 检测方法(见6 . 2) ;,一一增加了用于多杀性巴氏杆菌英膜型鉴定的多重PCR 检测方法(见6 . 3) ,本标准由农业部兽医局提出,本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAT/ TC 181) 归口,本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,本标准主要起草人:曲连东、郭东春、刘家森、姜毒、刘培欣,本标准的历次版本发布情况为:,一一-NY / T 563- 2002 0,I,NY/ T 563一2016,禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术,范围,本标准规定了禽霍乱的临床诊断和实验室诊断( 病原分离鉴定、琼脂扩散试验、PCR 检测方法和英,膜多重PCR 检测方法)的技术要求,本标准所规定的临床诊断、2温E…………E孟禽霍乱的诊断;多杀性巴氏杆菌PCR,适用于多杀性巴氏杆菌种咱组! 暨甲骨古啸~圃-圄芙膜血清型的鉴定,2,下列文件,件。凡是不注,GB/ T 47,3,GB/ T,Y/ T,下列,3. 1,4,禽霍,又名,4. 1 症状,4. 1. 1 急性,急性感染,吸困难，临死前出,4. 1.2 慢性型症状,f- nllQ/ ，二-~,急性型耐过或由弱毒监感染业明-‘呈慢咽…B贾特征主~惑染，在关节、趾垫、膛黯、胸,骨蒙古液囊、眼结膜、肉垂、咽晴- 孟囊、骨髓、自膜等部和呈现主~眈服性渗出、坏死或不同程度的,纤维化,4. 2 病理变化,急性型的病变主要是淤血、出血，肝、脾肿大和局灶性坏死，肺炎、腹腔和心包液增多。慢性型主要,是局灶性化服性渗出、坏死和纤维化,5 血清学检测方法:琼脂扩散试验(该方法不适用于水禽),5. 1 试剂材料,5. 1. 1 禽霍乱琼脂扩散抗原、标准阳性血清和标准阴性血清,按说明书使用,5. 1. 2 溶液配制,1,NYj T 563一2016,1 %硫柳隶溶液、pH6.4 的0 . 0 1 mo l/ L 磷酸盐缓冲( PBS ) 溶液和生理盐水，配制方法见A. 1 、A. 2,和A . 3 ,5. 1. 3 琼脂板,制备方法见B.4 ,5. 2 操作方法,5.2. 1 打孔,在制备的琼脂板上，用直径4 mm 的打孔器按六角形图案打孔或用梅花形打孔器打孔。中心孔与,外周孔之间的距离为3mm 。将孔中的琼脂挑出，勿伤边缘，避免琼脂层脱离平皿底部,5. 2. 2 封底,用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂微熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏,5. 2. 3 加样,灭菌生理盐水(A. 3) 稀释抗原，用微量移液器将稀释的抗原加入到中间孔，标准阳性血清分别加人,外周的1 孔、4 孔中，标准阴性血清(每批样品仅做一次) 和待检血清按顺序分别加人外周的2 孔、3 孔、5,孔、6 孔中。每孔均以加满不溢出为度，每加一个样品应换一个吸头,5. 2. 4 感作,加样完毕后，静止5 min ~ 10 min ，将平JJIl轻轻倒置，放入温盒内，置于3 7"C 温箱中作用，分别在24 h,和48 h 观察结果,5. 3 结果判定,5.3. 1 实验成立条件,将琼脂板置于日光灯或侧强光下观察，标准阳性血清与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，标,准阴性血清与抗原孔之间不出现沉淀线，则试验成立,5. 3. 2 结果判定,符合5.3 . 1 的条件,a) 若被检血清孔与中心孔之间出现清晰沉淀线，并与标准阳性血清孔与中心孔之间沉淀线的末,端相吻合，则被检血清判为阳性;,b) 若被检血清孔与中心孔之间不出现沉淀线，但标准阳性血清孔与中心孔之间的沉淀线一端在,被检血清孔处向中心孔方向弯曲，则此孔的被检样品判为弱阳性，应重复试验，如仍为可疑则,判为阳性;,c) 若被检血清孔与中心孔之间不出现沉淀线，标准阳性血清孔与中心孔之间的沉淀线指向被检,血清孔，则被检血清判为阴性;,d ) 若被检血清孔与中心孔之间出现的沉淀线粗而混浊和标准阳性血清孔与中心孔之间的沉淀线,交叉并直伸，待检血清孔为非特异性反应，应重复试验，若仍出现非特异性反应则判为阴性;,e) 出现上述a) 或b ) 的阳性结果，可判定禽体内存在禽霍乱抗体,6 病原学检测及鉴定方法,6. 1 病原分离鉴定方法,6. 1. 1 样品采集,按照NYj T 54 1 的要求采集并保存样品: 最急性和急性病例，可采集濒死或死亡禽只的肝、脾、心,血汁曼性病例， 一般采集局部病灶组织;活禽，通过鼻孔挤出黠液或将棉拭子插入鼻裂中采样。对不新鲜,或已被污染的样品，可采集骨髓样,6. 1. 2 镜检样品的制备,取病变组织肝或脾的新鲜切面，在载玻片上压片或涂抹成薄层;用灭菌剪刀剪开心脏，取血液进行,2,……
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